生物樣品往往是非常復(fù)雜的生物分子混合體，除少數(shù)特殊樣品外，一般不能直接與芯片反應(yīng)，必須將樣品進(jìn)行生物處理，試驗(yàn)探針的原理也是根據(jù)這些做成的。
 

　　首先，必須把我們所需要的細(xì)胞、顆粒從混和細(xì)胞中分離出來(lái)?，F(xiàn)在主要利用電場(chǎng)作用來(lái)分離細(xì)胞、細(xì)菌及顆粒(包括富集病毒以及破碎細(xì)胞使核酸和蛋白質(zhì)釋放出來(lái))。其中比較成熟的分離方法有介電電泳。
 

　　其原理是：在不均勻的變換頻率(在10～100kHz范圍內(nèi))的交流電場(chǎng)中，不同細(xì)胞或顆粒由于介電性質(zhì)不同而在交變電場(chǎng)中形成流過(guò)速度的差別，使某一類細(xì)胞或細(xì)菌(包括病毒)得到富集，從而達(dá)到分離各種顆粒的目的。
 

　　其次，分離后的細(xì)胞或顆粒用電脈沖或其他的方法進(jìn)行細(xì)胞溶解。溶解后的混和液用蛋白酶等進(jìn)行處理，除去蛋白質(zhì)。由于細(xì)胞中的DNA/mRNA等的含量較少，為了提高基因芯片的靈敏度，我們必須對(duì)分離出來(lái)的DNA/mRNA進(jìn)行擴(kuò)增。目前的擴(kuò)增方法主要是PCR擴(kuò)增。
 

　　后，為了獲得基因的雜交信號(hào)必須對(duì)目的基因進(jìn)行標(biāo)記。標(biāo)記方法有熒光標(biāo)記法、生物素標(biāo)記法、同位素標(biāo)記法等。常用的有以下幾種方法制備和標(biāo)記探針：將純化的樣品RNA通過(guò)特定的引物逆轉(zhuǎn)錄合成試驗(yàn)探針，在合成的過(guò)程中摻入標(biāo)記物；或者先將待測(cè)樣品的RNA轉(zhuǎn)錄合成cDNA，再進(jìn)一步通過(guò)加入標(biāo)記物進(jìn)行體外轉(zhuǎn)錄合成cRNA單鏈探針，又或者將合成的cDNA加標(biāo)記物和特殊引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，制備成標(biāo)記的雙鏈探針。
 

　　試驗(yàn)探針的使用方法：
 

　　先用20N插座保護(hù)門試驗(yàn)探針依次三個(gè)方向施加在保護(hù)門的不利的位置，同一位置三個(gè)方向施加20N的力約5秒鐘，探針金屬部分不能觸及帶插座電部件。
 

　　注意：操作期間不能旋轉(zhuǎn)探針，當(dāng)探針從一個(gè)方向變動(dòng)到另一個(gè)方向時(shí)，不施加力，但不能拔出探針。
 

　　然后用1N插座保護(hù)門試驗(yàn)探針以三個(gè)方向施加1N的力。每個(gè)方向約5秒鐘，探針金屬部分不能觸及帶插座電部件。
 

　　注意：本次試驗(yàn)需獨(dú)立碰觸，每一次碰觸后都要拔出探針。
 

　　試驗(yàn)探針的注意事項(xiàng)：
 

　　請(qǐng)不要輕易調(diào)整推力，如需調(diào)整，請(qǐng)使用分辨精度至少為0.033N儀器對(duì)1N探針進(jìn)行校準(zhǔn)。
 

　　由于試驗(yàn)探棒較為精密機(jī)械產(chǎn)品，使用時(shí)請(qǐng)輕拿輕放，妥善保管。
 

　　試驗(yàn)探針的金屬部分(95w18Cr4V-HRC70)會(huì)生銹，注意保養(yǎng)防護(hù)。
 

　　以上便是今天關(guān)于試驗(yàn)探針原理的應(yīng)用及使用方法、注意事項(xiàng)的全部分享了，希望對(duì)大家今后使用本設(shè)備能有幫助。